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大腸癌實驗動物犧牲
一、前準備:
1.貼標籤
2.剪paraflim
3.剪濾紙
4.一號濾紙貼標籤
5.貼抗汙紙(注意角落)
二、動物房:
1.前一天動物禁食。
2.當天近動物房運出犧牲動物,並登記。
3.動物放置廢液桶內秤重、紀錄。
三、乙醚麻醉:(開抽器開關)
1.大離心管放入擦手紙,倒入乙醚;乙醚桶舖上擦手紙,倒入乙醚。
2.放入rat,一段時間後晃動桶子,確認動物是否昏迷。若要抽取動脈血,實驗動物不可放置乙醚桶過久,以免死亡心臟停止跳動,無法抽取。
3.取出rat固定四肢在固定板上,將rat鼻子放置裝有乙醚的大離心管,並露出嘴部,避免死亡。
三、解剖:
1.動脈血:
(1)手部消毒,在rat腹部噴酒精,用手抓取下腹部皮橫剪一刀,再U型由上縱剪。
(2)聶子夾開毛皮肌肉再用止血棉撥開腹腔內臟及腹膜,右邊腹腔靜脈旁有一條白色動脈。使用採血針平行採血。
2.腸組織:
(1)正放,找出腸子(前面有胃),聶子輕夾腸子沿著腸邊緣剪下。到直腸末端,將骨盆骨剪開,小心取出直腸(有一圈粉紅色擴約肌)。
(2)量總長,在分成盲腸端(魚骨文)、中間端、直腸端(擴約肌)。泡在NS生理食鹽水內。
(3)修剪腸膜後,沿著腸膜線將腸子剪開,需小心可能有colon cancer之處。
(4)用NS清洗,可放置擦手紙上輕壓看是否乾淨。
(5)秤重。
(6)舖平置於濾紙上,並拿另一張濾紙蓋上。
(7)放入培養皿,並加入福馬林淹過組織。
3.colon cancer:
(1)紀錄位置:ex:中段近盲腸端3.5 cm。游標尺規零,量取腫瘤長*寬*高。
(2)剪下腫瘤(蕈傘+蕈柄)和周圍部份組織。放入玻璃罐內加入福馬林蓋過腫瘤組織,用parafilm密封。
(3)詳細標籤。
4.musin:
(1)用ependoph泡製buffer,protein inhibitor(PI)3μl+RIPA buffer 300μl,放在冰桶預備。
(2)將腸內面朝上,攤平在玻片上。若捲曲,可將其對折後慢慢攤平。
(3)聶子輕固定靠近端,從一半的腸道用玻片窄邊垂直刮取黏膜,放入相對的enpen冰浴。
(4)結束後放入-80℃保存,若不久後要分析,及放-20℃冰箱。
四、後作業:
1.染血丟感染性廢棄物。
2.所有器材清洗,並用酒精消毒,放置hood。
3.動物籠放置動物房B2電梯對面,感廢放置冰箱內。
一、前準備:
1.貼標籤
2.剪paraflim
3.剪濾紙
4.一號濾紙貼標籤
5.貼抗汙紙(注意角落)
二、動物房:
1.前一天動物禁食。
2.當天近動物房運出犧牲動物,並登記。
3.動物放置廢液桶內秤重、紀錄。
三、乙醚麻醉:(開抽器開關)
1.大離心管放入擦手紙,倒入乙醚;乙醚桶舖上擦手紙,倒入乙醚。
2.放入rat,一段時間後晃動桶子,確認動物是否昏迷。若要抽取動脈血,實驗動物不可放置乙醚桶過久,以免死亡心臟停止跳動,無法抽取。
3.取出rat固定四肢在固定板上,將rat鼻子放置裝有乙醚的大離心管,並露出嘴部,避免死亡。
三、解剖:
1.動脈血:
(1)手部消毒,在rat腹部噴酒精,用手抓取下腹部皮橫剪一刀,再U型由上縱剪。
(2)聶子夾開毛皮肌肉再用止血棉撥開腹腔內臟及腹膜,右邊腹腔靜脈旁有一條白色動脈。使用採血針平行採血。
2.腸組織:
(1)正放,找出腸子(前面有胃),聶子輕夾腸子沿著腸邊緣剪下。到直腸末端,將骨盆骨剪開,小心取出直腸(有一圈粉紅色擴約肌)。
(2)量總長,在分成盲腸端(魚骨文)、中間端、直腸端(擴約肌)。泡在NS生理食鹽水內。
(3)修剪腸膜後,沿著腸膜線將腸子剪開,需小心可能有colon cancer之處。
(4)用NS清洗,可放置擦手紙上輕壓看是否乾淨。
(5)秤重。
(6)舖平置於濾紙上,並拿另一張濾紙蓋上。
(7)放入培養皿,並加入福馬林淹過組織。
3.colon cancer:
(1)紀錄位置:ex:中段近盲腸端3.5 cm。游標尺規零,量取腫瘤長*寬*高。
(2)剪下腫瘤(蕈傘+蕈柄)和周圍部份組織。放入玻璃罐內加入福馬林蓋過腫瘤組織,用parafilm密封。
(3)詳細標籤。
4.musin:
(1)用ependoph泡製buffer,protein inhibitor(PI)3μl+RIPA buffer 300μl,放在冰桶預備。
(2)將腸內面朝上,攤平在玻片上。若捲曲,可將其對折後慢慢攤平。
(3)聶子輕固定靠近端,從一半的腸道用玻片窄邊垂直刮取黏膜,放入相對的enpen冰浴。
(4)結束後放入-80℃保存,若不久後要分析,及放-20℃冰箱。
四、後作業:
1.染血丟感染性廢棄物。
2.所有器材清洗,並用酒精消毒,放置hood。
3.動物籠放置動物房B2電梯對面,感廢放置冰箱內。
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