明萱營養天地

大腸癌實驗動物犧牲
一、前準備：
1.貼標籤
2.剪paraflim
3.剪濾紙
4.一號濾紙貼標籤
5.貼抗汙紙(注意角落)
二、動物房：
1.前一天動物禁食。
2.當天近動物房運出犧牲動物，並登記。
3.動物放置廢液桶內秤重、紀錄。

三、乙醚麻醉：(開抽器開關)
1.大離心管放入擦手紙，倒入乙醚；乙醚桶舖上擦手紙，倒入乙醚。
2.放入rat，一段時間後晃動桶子，確認動物是否昏迷。若要抽取動脈血，實驗動物不可放置乙醚桶過久，以免死亡心臟停止跳動，無法抽取。
3.取出rat固定四肢在固定板上，將rat鼻子放置裝有乙醚的大離心管，並露出嘴部，避免死亡。

三、解剖：
1.動脈血：
(1)手部消毒，在rat腹部噴酒精，用手抓取下腹部皮橫剪一刀，再U型由上縱剪。
(2)聶子夾開毛皮肌肉再用止血棉撥開腹腔內臟及腹膜，右邊腹腔靜脈旁有一條白色動脈。使用採血針平行採血。
2.腸組織：
(1)正放，找出腸子(前面有胃)，聶子輕夾腸子沿著腸邊緣剪下。到直腸末端，將骨盆骨剪開，小心取出直腸(有一圈粉紅色擴約肌)。
(2)量總長，在分成盲腸端(魚骨文)、中間端、直腸端(擴約肌)。泡在NS生理食鹽水內。
(3)修剪腸膜後，沿著腸膜線將腸子剪開，需小心可能有colon cancer之處。
(4)用NS清洗，可放置擦手紙上輕壓看是否乾淨。
(5)秤重。
(6)舖平置於濾紙上，並拿另一張濾紙蓋上。
(7)放入培養皿，並加入福馬林淹過組織。
3.colon cancer：
(1)紀錄位置：ex：中段近盲腸端3.5 cm。游標尺規零，量取腫瘤長*寬*高。
(2)剪下腫瘤(蕈傘+蕈柄)和周圍部份組織。放入玻璃罐內加入福馬林蓋過腫瘤組織，用parafilm密封。
(3)詳細標籤。
4.musin：
(1)用ependoph泡製buffer，protein inhibitor(PI)3μl+RIPA buffer 300μl，放在冰桶預備。
(2)將腸內面朝上，攤平在玻片上。若捲曲，可將其對折後慢慢攤平。
(3)聶子輕固定靠近端，從一半的腸道用玻片窄邊垂直刮取黏膜，放入相對的enpen冰浴。
(4)結束後放入-80℃保存，若不久後要分析，及放-20℃冰箱。

四、後作業：
1.染血丟感染性廢棄物。
2.所有器材清洗，並用酒精消毒，放置hood。
3.動物籠放置動物房B2電梯對面，感廢放置冰箱內。